水浴式pcr仪仪器本身有3个不同温度的水浴,用机械装置将带有反应管的架子移位和升降温度,使温度循环。优点:水为传热介质,温度易恒定,实时荧光定量pcr仪,热容量大;反应管形状无特殊要求,温度转换较快扩增效果稳定;具有较高的运行效率,扩增产物特---好。缺点:高温浴不稳定,水面需用液体石蜡覆盖;改变水浴温度所需时间较长,定量pcr仪,不易实施复杂程序(如套式pcr)的操作,仪器体积较大;室温影响温度下限。
我们上面提到了反应的原理,由此我们可以简单的推断:温度作为变性-复性-延伸的基本设置,这个是我们需要校准的一个项目。
那么在反应的过程中,温度示值与设定值是否准确,我们需要知道。这是个温度示值误差;因为我们需要升温,降温,升温,这是不是涉及到一个速率的问题,升降温的快慢,会直接影响到整个反应过程,所以,升降温速率也是我们需要考量的一个方向。仪器通过加热模块去控制温度,在快速升降温的过程中,仪器不可避免的会先升高/降低温度之后,再达到所设定的问题,这就是温度的过冲,这也是可能也是一个考量的指标。达到一定的温度之后,仪器要平衡一段时间(所设定的时间),而温度平衡的时间和设置的时间,是否一致,也是要考虑的一个方向。不同的dna模板,需要的温度和解链的时间不一样,pcr仪,如果解链的时间没达到要求,dna没有完全变性,在降温复性的过程中,会恢复到天然的状态。
pcr仪是什么以及分类:
通过pcr(聚合酶链式反应)技术,对特定dna进行扩增的仪器。
普通pcr仪:只进行pcr扩增的pcr仪,进口pcr仪,实际上是一个温控设备。
实时荧光pcr仪:在普通pcr仪的基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
普通pcr仪只能实现dna的扩增,分析检测需要在扩增之后。而扩增后到检测分析的这个过程,因为要将样品中仪器中取出来,所以容易受到污染,同时也容易污染环境。
实时荧光pcr仪:在作为温控设备的同时加入荧光分析系统。
在扩增的同时,通过前期准备工作的时候,pcr扩增体系中加入荧光集团,而后通过荧光信号采集系统实时采集,存储数据,将检测分析步骤集中到仪器上,减少人员后续的检测操作,降低了污染和被污染的风险。
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