由于实时荧光定量pcr方法比elisa灵敏很多,因此,血站或---研究所一般用来研究elisa方法的漏检率,即分析elisa方法测定为阴性的血样,再用实时荧光定量pcr方法来复检。复检时,一般24个elisa阴性的血样混合成一个样本进行检测。上海用此方法在用于---制品的---中发现一例hiv,定量pcr仪,后经测定供血者,证实的确是hiv阳性。北京市红十字---中心正在测定北京血站中5万份elisa阴性血样的漏检率。由于不同地区所用的elisa试剂、方法、批号等都不相同,因此不同地区都有---进行这一工作。由于荧光定量pcr方法的快速、灵敏、定量的特点,其在研究及开发方面的应用是不胜枚举的,如研究个人基因型与之间的关系等;研究人员也可以根据自己研究项目开发其新的用途。
pcr的反应包括三个主要步骤:分别是1. denaturation 2. annealing of primers,3. extension of primers。 所谓 denaturing乃是将dna加热变性,pcr仪, 将双股的dna加热后转为单股dna以做为的模板. 而annealing 则是令 primers于一定的温度下附着于模板dna两端。 后在dna聚合酶 e.g. taq-polymerase 的作用下进行引物的延长 extension of primers及另一股的合成。
在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时,为了---实验结果的性和准确性都要在实验中使用rox(一种荧光染料)或的reference dye,这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来,真正能检测多重pcr荧光信号的有效通道只有4个,实时荧光定量pcr仪,而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量pcr的检测通道是只为自已厂家的的荧光染料或试剂开放的,有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量pcr仪器的有效检测通道尤为重要,不能单单只听宣传。
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