常见的易致胎儿畸形的性---原体主要有单疱---(hsvⅱ)、---(rv)、人巨细胞---(hcmv)、弓形体(tox)及衣原体(ct)。以往这些病原体诊断比较困难,主要靠培养法进行---,而培养法费时,pcr仪批发,代价昂贵,而且受到采样、样本保存及用药等因素的影响,荧光定量pcr仪价格,基本不能在---中推广。pcr基因扩增法因其高敏感性、高特---非常适合这些---诊断及---,是的检验方法。
由于实时荧光定量pcr方法比elisa灵敏很多,因此,血站或---研究所一般用来研究elisa方法的漏检率,即分析elisa方法测定为阴性的血样,小型pcr仪,再用实时荧光定量pcr方法来复检。复检时,一般24个elisa阴性的血样混合成一个样本进行检测。上海用此方法在用于---制品的---中发现一例hiv,后经测定供血者,证实的确是hiv阳性。北京市红十字---中心正在测定北京血站中5万份elisa阴性血样的漏检率。由于不同地区所用的elisa试剂、方法、批号等都不相同,因此不同地区都有---进行这一工作。由于荧光定量pcr方法的快速、灵敏、定量的特点,其在研究及开发方面的应用是不胜枚举的,如研究个人基因型与之间的关系等;研究人员也可以根据自己研究项目开发其新的用途。
pcr技术的原理类似于dna的天然过程,其特---依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成 [2] 。1. 模板dna的变性模板dna经加热至93℃左右一定时间后,使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离,使之成为单链,以便它与引物结合,pcr仪,为下轮反应作准备。2. 模板dna与引物的退火(复性)模板dna经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板dna单链互补序列配对结合。3. 引物的延伸dna模板-引物结合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留原理,合成一条新的与模板dna链互补的半保留链。
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